潔凈室沉降菌檢測標準操作規(guī)程

⒈ 目的：建立沉降檢測的標準操作程序，用以規(guī)范員工的檢測操作。

⒉ 范圍：適用于公司內(nèi)部生產(chǎn)潔凈區(qū)內(nèi)的沉降菌檢測工作

⒊ 責任：生產(chǎn)部、生產(chǎn)車間、質(zhì)量管理部、QC檢驗室主任、檢驗員對本規(guī)程的執(zhí)行負責。

⒋ 檢測依據(jù)：YY/T0188.6－1995藥品檢驗操作規(guī)程，第6部分，藥品生物測定法。

⒌ 內(nèi)容：

5.1 設(shè)備：高壓消毒鍋、恒溫培養(yǎng)箱；

5.2 培養(yǎng)基及平皿制備：

5.2.1 培養(yǎng)皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。

5.2.2 培養(yǎng)基一般采用普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其它藥典認可的培養(yǎng)基。

5.2.3 將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘或于180℃干熱滅菌2小時。

5.2.4將培養(yǎng)基加熱溶化，冷至45℃時，在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。

5.2.5 待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平面倒置于30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，若培養(yǎng)基平面上確無菌落生長，即可供采樣用。

5.2.6 制備好的培養(yǎng)基平面宜在2～8℃的環(huán)境中存放。

5.3 采樣點：

5.3.1 采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中，按照潔凈區(qū)的面積大小，而制定最少采樣點數(shù)目，在滿足最少測點數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。

最少采樣點數(shù)目

5.3.2 工作區(qū)采樣點的位置離地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。并在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。

5.3.3 測試標準

潔凈區(qū)微生物監(jiān)控的靜態(tài)標準(a)如下：

潔凈區(qū)微生物監(jiān)控的動態(tài)標準(a)如下：

5.4 測試規(guī)則

5.4.1 測試狀態(tài)

5.4.1.1 沉降菌測試前,被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度必須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。

5.4.1.2 沉降菌測試前被測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。

5.4.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)二種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

靜態(tài)測試時潔凈室凈化空調(diào)系統(tǒng)已處于正常運行狀態(tài)。

動態(tài)測試時潔凈室已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)。

5.4.2 測試人員

5.4.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服.

5.4.2.2 靜態(tài)測試時，所有生產(chǎn)設(shè)備均已安裝就緒，但未運行，室內(nèi)測試人員不得多于二人。

測試時間：對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10分鐘后開始；對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘后開始。

5.4.2.3 動態(tài)測試時，所有生產(chǎn)設(shè)備按預定的工藝模式運行并有規(guī)定數(shù)量的操作人員在現(xiàn)場操作。

5.4.3 測試步驟

5.4.3.1 采樣方法:將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點的布置要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)皿表面暴露0.5小時 ，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。

5.4.3.2 培養(yǎng)：全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中，在30～35℃培養(yǎng)，時間不少于48小時。

5.4.3.3 菌落計數(shù)：用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點記，然后用5～10倍放大鏡檢查，有無遺漏。若培養(yǎng)皿上有二個以上菌落重疊，可分辨時以二個以上菌落數(shù)計數(shù)。

5.5 注意事項：

5.5.1 測試用具要做無菌處理，以確保測試的可靠性，正確性。

5.5.2 采取一切措施，防止人為對樣本的污染。

5.5.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其它參數(shù)做祥細的記錄。

5.5.4 計數(shù)時一般用透射光對培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏記培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別。必要時，用顯微鏡鑒別。

5.5.5 采樣前應仔細檢驗每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量,如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應剔除。

5.6 結(jié)果計算：

用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，按下式計算：

          M1+M2+………+Mn

平均菌落M=————————

                   n               

式中：M--平均菌落數(shù)

M1--1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)

M2--2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)

Mn--n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)

n--培養(yǎng)皿總數(shù)

5.7 結(jié)果評定：用平均菌落數(shù)判斷（區(qū)）空氣中微生物。

5.7.1 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準。

5.7.2 若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。

5.8 記錄：

5.8.1 測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。記錄必須有日期和實驗員簽名，并交質(zhì)量管理科會簽。

5.8.2 記錄本應保留至最后一次記錄后的二年。

5.8.3 存檔處必須在記錄本中注明。